ABC | Volume 111, Nº3, Setembro 2018

Artigo Original Pinotti et al Ciclos de jejum/realimentação e remodelamento miocárdico Arq Bras Cardiol. 2018; 111(3):400-409 repouso (TR, g/mm 2 ), tempo para atingir o pico da tensão desenvolvida (TPT, ms), velocidade máxima de variação da tensão desenvolvida (+dT/dt, g/mm 2 /s) e velocidade máxima de variação de decréscimo da tensão desenvolvida (-dT/dt, g/mm 2 /s). Os parâmetros isotônicos foram porcentagem de encurtamento (PS, %), tempo para encurtamento máximo (TPS, ms), velocidade máxima de encurtamento (-dL/dt, ML/s) e velocidade máxima de relaxamento (+dL/dt, ML/s), onde ML/s é o comprimento muscular por segundo. O comportamento mecânico do músculo papilar foi avaliado sob condições basais de concentração de Ca 2+ de 1,25 mM e após as seguintes manobras inotrópicas: aumento da concentração de Ca 2+ extracelular de 0,625 para 1,25, 2,5 e 5,2 mM, e estimulação beta-adrenérgica com 0,01, 0,1 e 1,0 µM de isoproterenol. Os parâmetros usados para caracterizar o músculo papilar foram: comprimento (mm), peso (mg) e AS (mm 2 ). O comprimento muscular associado à TD máxima foi definido como L max in vitro e medido com um catetômetro Gartner (Chicago, IL, EUA). Para comparar a função mecânica entre diferentes comprimentos musculares, parâmetros isométricos e isotônicos foram normalizados pela AS e pelo L max . Estudo morfológico Para o estudo ultraestrutural (três animais por grupo), pequenos fragmentos do músculo papilar VE foram fixados em solução de Karnovsky em 0,12 M fosfato, pH de 7,2 por 1-2 horas e pós-fixados em 1% tetróxido de ósmio em 0,1 M tampão fosfato por 2 horas. 25 Após desidratação em uma série graduada de etanol, as amostras foram incluídas em resina de epóxi. Cortes ultrafinos de áreas selecionadas foram feitos com navalhas de diamante, submetidos a duplo contraste com acetato de uranila e citrato de chumbo, e examinados em microscópio eletrônico Philips EM 301. A AS do miócito VE foi medida com microscópio composto ligado a sistema computadorizado de análise de imagem (Image-Pro Plus 3.0, Media Cybernetics, Silver Springs, MD, EUA). Análise estatística As análises estatísticas foram realizadas usando o programa SigmaStat 3.5 (SYSTAT Software Inc., San Jose, CA, EUA). As variáveis das características gerais e da funçãomiocárdica em condição basal com distribuição normal foram expressas como médias ± desvio-padrão (DP). Os grupos foram comparados usando-se análise de variância (ANOVA) de uma via para amostras independentes. Utilizou-se ANOVA de duas vias para medidas repetidas para avaliar a evolução do peso corporal e os efeitos inotrópicos positivos e negativos na função miocárdica. Quando houve diferença significativa (p < 0,05), usou-se os testes post hoc de Tukey ou Bonferroni para comparações múltiplas. Adotou-se o nível de significância de 5%. Determinou-se o tamanho da amostra (n) com a equação: n = 1 + [2C * (s/d) 2 ], onde C (z score α + z score β ) 2 depende dos valores escolhidos para poder estatístico do teste (90%; erro tipo II) e nível de significância (0,05; erro tipo I); o valor do desvio-padrão (s) adotado foi 0,25, sendo a mínima diferença entre os grupos (d) de 0,5. O tamanho de amostra necessário para detectar uma diferença significativa entre os grupos foi de 6,25 ratos por grupo. Entretanto, decidimos usar 7 animais por grupo para a maioria das análises. Resultados Características gerais e morfológicas dos ratos Valores significativamente elevados de PCF, VE, VD, VE/PCF e VD/PCF foram encontrados no grupo C em comparação aos grupos R 50 e RF (Tabela 2). Após 12 semanas, os ciclos de jejum/realimentação promoveram substancial elevação do PCF e do consumo alimentar que foram significativamente maiores do que aqueles no grupo R 50 . Em relação aos parâmetros cardíacos, os grupos RF e R 50 apresentaram comportamento diferente. Especificamente, o VE (RF: 12,12% e R 50 : 48,5%; p < 0,05), o VD (RF: 19,04% e R 50 : 47,62%; p < 0,05), o VE/PCF (RF: 6,64% e R 50 : 19,2%; p < 0,05) e o VD/PCF (RF: 12,06% e R 50 : 18,96%; p < 0,05) apresentaram redução percentual nos ratos dos grupos RF e R 50 em comparação àqueles do grupo C. Entretanto, os ratos submetidos aos ciclos de jejum/realimentação apresentaram menos atrofia cardíaca do que os do grupo R 50 em relação aos do grupo C. Além disso, os ratos do grupo C apresentaram ganho corporal crescente, enquanto aqueles do grupo R 50 mantiveram seu PCI após 12 semanas de protocolo experimental (Figura 1). Por outro lado, os ratos do grupo RF ganharam peso dependendo da ingestão de alimento, com aumento e redução de peso corporal durante as fases de realimentação e jejum, respectivamente (Figura 1). Desempenho do músculo isolado Os ciclos de jejum/realimentação não causaram comprometimento funcional (Tabelas 3 e 4). Entretanto, os parâmetros isotônicos [-dL/dt, TPS, TR 50 ] e isométricos (TPT, +dT/dt, -dT/dt, TR 50 )mostraram-se significativamente elevados nos ratos do grupo RF em comparação àqueles do grupo R 50 , indicando que os ciclos de jejum/realimentação preservam a fase de contração e relaxamento da função cardíaca. Além disso, os ratos do grupo R 50 apresentaram dano cardíaco em relação aos do grupo C para as variáveis isotônicas e isométricas. A AS do músculo papilar não diferiu entre os grupos. Estimulação com cálcio extracelular As elevações da concentração de Ca 2+ extracelular de 0,625 para 5,2 mM resultaram em efeito inotrópico positivo nos miócitos de todos os grupos (Figuras 2A-F). Entretanto, os resultados mostrados nas Figuras 2B, C e E indicam que o Ca 2+ extracelular (1,25 e 2,5 mM) induziu maior resposta em+dT/dt (RF: 99,1 ± 23,6; 132,1 ± 36,2 g/mm 2 /s vs. R 50 : 63,2 ± 12,8; 91,5 ± 22,0 g/mm 2 /s; p < 0,05, respectivamente), -dT/dt (RF: 30,6 ± 5,9; 35,9 ± 5,8 g/mm 2 /s vs. R 50 : 22,0 ± 4,4; 28,5 ± 6,1 g/mm 2 /s; p < 0,05, respectivamente) e -dL/dt (RF: 2,19 ±0,45; 2,77 ± 0,51 ML/s vs. R 50 : 1,47 ± 0,24; 1,99 ± 0,31 ML/s; p < 0.05, respectivamente) nos ratos do grupo RF do que nos do grupo R 50 . Além disso, -dT/dt e -dL/dt estavam significativamente reduzidos no miocárdio de ratos do 402