ABC | Volume 110, Nº1, Janeiro 2018

Artigo Original Fischer et al Polimorfismos e extensão da doença coronária Arq Bras Cardiol. 2018; 110(1):16-23 Coleta de sangue para dosagens laboratoriais O sangue foi obtido em jejum de 12 horas e os exames laboratoriais foram realizados no Laboratório AFIP (Associaço Fundo de Apoio a Psicobiologia). Os testes geneticos foram realizados no Laboratorio de Biologia Molecular do Setor de Lipides, Aterosclerose e Biologia Vascular. Exames bioquimicos O perfil lipidico (colesterol total, LDL-c, HDL-c, triglicerides) foi analisado por método automatizado (Ópera, Bayer, Alemanha), a glicemia por reaço colorimetrica (ADVIA 1650 Chemistry System, EUA), e a hemoglobina glicada (HbA1c) por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC, em aparelho Tosoh A1c 2,2 plus, EUA). A média da insulina em jejum nos tempos -15, -5 e 0 minutos, foi analisada por método de quimiluminescencia direta (ADVIA Centaur, EUA), com valores expressos em μU/mL. As apolipoproteinas AI, B, Lp(a) foram analisadas por nefelometria (Array 360 da Beckmann), a proteina C-reativa ultra-sensivel (PCR-us) pela tecnica de imunoensaio por nefelometria (R100 analyzer da Behringer). A adiponectina foi analisada por ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), utilizando kit Human Adiponectin/Acrp30 Immunoassay – Quantiquine da R&D Systems, em leitora de ELISA Biotech ELX 800, com valores expressos em ng/mL. A dosagem da albuminuria foi analisada em amostras de urina noturna (12h) por imunoturbidimetria (ADVIA 1650, Chemistry System, EUA), com resultados expressos em mg/L. O estresse oxidativo do plasma foi analisado pela técnica dos TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, do inglês Thiobarbituric acid reactive substances), descrito por Ohkawa et al., 29 com leitura em espectrofotometro (Genesys 2, Spectronic), e resultados expressos em nanomoles de malondialdeido (MDA) por mililitros de plasma ( η moles/mL plasma). Vasorreativbidade Oexame da vasodilatação dependente (FMD, flow-mediated dilation , ou dilatação fluxo-mediada) e independente do endotélio (RVEI, relaxamento vascular independente do endotélio) foi realizado pela manhã, após jejum de 12 horas, por umultrassonografista experiente, conforme recomendaçes da Diretriz da Forca Tarefa Internacional dos estudos de reatividade da arteria branquial. 30 Utilizou-se um sistema de ultrassom (Sonos 5500; Hewlett-Packard-Phillips, Palo Alto, CA), equipado com software vascular para imagens bidimensionais, Doppler colorido e espectral, com monitoração interna do eletrocardiograma e transdutor linear (com frequência variando entre 7,5 e 12,0 MHz). A aquisição de imagens, a medida da FMD e do RVEI com dinitrato de isossorbida (5 mg; sublingual) foram obtidos. As variações percentuais no diâmetro do vaso foram calculadas para determinar a FMD e a RVEI, sendo expressas em %. Os coeficientes de variação intra- e inter- observador foram < 1 e 2%, respectivamente. Escore de Gensini O escore de Gensini foi utilizado para avaliar a gravidade da doenca coronariana pela cineangiocoronariografia. O escore de Gensini e calculado levando em consideraço a magnitude das lesoes e o miocardio em risco, dando pontuaçes aos diferentes graus de obstruço e aos diversos segmentos acometidos. As lesões que causam obstrução de 25% recebem o escore de 1, 50%, 2, 75%, 4, 90%, 8, 99%, 16, 100%, 32. Em relação à localização: tronco da coronária esquerda: 5 pontos; artéria descendente anterior proximal: 2,5 pontos; artéria descendente anterior 1/3 médio 1,5 pontos; artéria descendente anterior distal 1 ponto; artéria primeira diagonal 1 ponto; artéria segunda diagonal 0,5 ponto; artéria circunflexa proximal 2,5 pontos; artéria circunflexa distal 1 ponto; primeiro e segundo ramos marginais da artéria circunflexa proximal 1 ponto e distal 0,5 ponto; artéria coronária direita proximal, distal e ramo descendente posterior 1 ponto. O escore de Gensini e o resultado da soma dos escores de cada lesão, multiplicando o grau de estenose pela localizaço da lesao, sendo expresso em unidades arbitrárias (UA). 11,31 Estudo genetico Foram analisados os polimorfismos dos genes paraoxonase-1 ( PON-1 ), metilenotetrahidrofolato redutase ( MTHFR ), óxido nítrico sintase endotelial ( ENOS ), enzima conversora da angiotensina ( ECA ), receptor tipo 1 da angiotensina II ( AT1R ), apolipoproteína C3 ( APOC3 ), lipoproteína lipase ( LPL ) foram analisados a partir de amostras de sangue total colhido com EDTA (ácido etilenodiaminotetracético), por técnica da reação em cadeia da polimerase ( Polymerase Chain Reaction , PCR), seguida da identificação dos polimorfismos no comprimento do fragmento de restrição ( Restriction Fragment Length Polymorphisms , RFLP), nas condições descritas na Tabela 1. O escore genético foi calculado assumindo-se o modelo de dominância dos polimorfismos, considerados como variáveis dicotômicas, binárias. Analise estatistica O tamanho amostral foi estimado para comparações de proporções, considerando-se o modelo de dominância dos polimorfismos, um erro α de 5%, um poder β de 80%, um nível de confiança de 95%, e uma proporção esperada de 50%. Assim, o tamanho amostral estimado foi de 90 participantes. Todas as analises foram realizadas utilizando‑se o programa SPSS 22.0 para Mac. As variaveis categoricas foram expressas como n (%) e comparadas entre os genotipos pelo teste do qui-quadrado de Pearson ou teste exato de Fisher, conforme apropriado. Para analisar se a distribuiço das frequencias genotipicas observadas e esperadas estava de acordo com o equilibrio de Hardy-Weinberg, utilizou-se o teste do qui‑quadrado de Pearson. As variaveis numericas foram expressas como media ± desvio padrao (DP) ou mediana e intervalo interquartil (IQ). O teste de Kolmogorov - Smirnov foi utilizado para avaliar se as variáveis apresentavam distribuição normal. A estatistica descritiva utilizou teste t de Student ou o teste de Mann-Whitney para amostras nao relacionadas, caso as variaveis nao apresentassem distribuiço gaussiana. Utilizou-se o coeficiente de correlação de Pearson para avaliar as correlaçes entre o escore genetico e o escore de Gensini. Considerou-se nivel de significancia para valores de p < 0,05. 18