ABC | Volume 114, Nº2, Fevereiro 2020

Artigo Original Stefani et al. Dano em DNA e insuficiência cardíaca Arq Bras Cardiol. 2020; 114(2):234-242 Introdução A insuficiência cardíaca é uma síndrome complexa que caracteriza anomalias estruturais e funcionais do coração na manutenção da demanda sanguínea adequada. A insuficiência cardíaca crônica (ICC) afeta aproximadamente 1 a 2% da população de países desenvolvidos e sua prevalência aumenta pelo menos 10% em adultos idosos. 1 Uma das causas mais comuns de insuficiência cardíaca é o infarto do miocárdio (IM), que induz a remodelação cardíaca patológica. 2 Essa síndrome não afeta apenas o coração, mas também outros órgãos, como pulmões e músculos esqueléticos. 3 A ICC é caracterizada por alterações na mecânica ventilatória que prejudicam a captação e o suprimento de oxigênio aos sistemas. A hipoperfusão, que é sustentada por uma disfunção ventricular em um ciclo vicioso, induz estresse oxidativo na maioria dos tecidos. 4 O estresse oxidativo é um estado em que a célula está em desequilíbrio oxidativo, formando espécies mais reativas que sua capacidade neutralizadora. 5 Foi proposto em outro estudo que biomarcadores do estresse oxidativo, como a concentração demalondialdeído e ácido úrico, poderiamesclarecer a extensão dodano oxidativo e orientar o tratamento empacientes comICC. 6 Como as espécies reativas de oxigênio (ERO) podemdanificar diferentes biomoléculas, como lipídios, proteínas e DNA, os danos nos ácidos nucléicos não foram consistentemente investigados na ICC. Um biomarcador que já foi alvo de investigação é a concentração de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina (8-OHdG). 7 No entanto, sua medição reflete o dano oxidativo em um tipo de lesão de DNA, que não reflete o dano total na hélice do DNA. Para isso, ensaios toxicológicos, como o cometa, nunca foram testados na ICC, como objetivo de avaliar o dano global ao DNA em diferentes tecidos. Essa técnica é amplamente utilizada em estudos toxicológicos e é considerada consistente, sensível e altamente reproduzível. 8 O ensaio do cometa mede diretamente a extensão do dano ao DNA, constituído por quebras de fita simples e dupla do DNA. 9 Esse método permite sua medida no sangue e em todos os tecidos de interesse, expandindo a análise de danos locais e sua correlação com parâmetros fisiológicos e funcionais. 10 Na insuficiência cardíaca, ainda não está claro como a incapacidade da insuficiência cardíaca pode afetar diferentes estruturas além do sistema cardiovascular, principalmente no dano ao DNA. Como na ICC existe um cenário de dano oxidativo sistêmico em função da cronicidade da síndrome, o objetivo deste estudo foi avaliar o dano ao DNA em diferentes tecidos, como o ventrículo esquerdo, os pulmões e os músculos esqueléticos (diafragma, gastrocnêmio e sóleo) em ratos afetados pela doença. Métodos Animais Foram selecionados 12 ratos machos Wistar (100 dias de idade, de 300 a 330 g) da Unidade de Melhoramento Animal da Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre (UFCSPA, Brasil). Os animais foram alojados em grupos de três animais por gaiola, que receberam comida e água ad libitum em uma sala específica mantida a 22°C sob um ciclo claro e escuro de 12:12 horas. O manejo dos animais obedeceu à Lei nº 11.794, de 08/08/2008, Lei nº 6.899, de 15/07/2009, e à Resolução nº 879, de 15/02/2008 (CFMV), além de outras disposições aplicáveis ao uso de animais para pesquisa. O experimento cumpriu as resoluções do Conselho Nacional de Experimentação Animal, o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Instituto de Recursos Animais de Laboratório, Academia Nacional de Ciências, Washington, D.C., 1996), bem como dos Princípios Éticos em Experimentação Animal do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA). Este estudo foi aprovado por CEUA/UFCSPA, sob o número de protocolo 114/13. Indução de Infarto do Miocárdio (IM) Os animais foram anestesiados com xilazina (12 mg/kg ip) e cetamina (90 mg/kg ip), intubados e ventilados artificialmente. Foi realizada a ligadura da artéria coronária esquerda. As operações placebo foram realizadas conforme descrito em outro estudo. 11 Após as cirurgias, os animais receberam uma injeção de cetoprofano (5,4 mg/kg ip) a cada 6 horas – completando 48 horas – e penicilina (70.000 unidades/ml ip). As cirurgias foram realizadas por um cirurgião. A taxa de mortalidade pós-operatória foi de 15%. Após a indução do IM, foram designadas 6 semanas de recuperação, necessárias para os animais desenvolverem ICC. Foramutilizadas diferentes variáveis para caracterizar e documentar a insuficiência cardíaca desenvolvida por esses animais, como presença de trombos atriais esquerdos, derrames torácicos, congestão pulmonar, hipertrofia ventricular esquerda e direita do peso corporal. 12 Insuficiência Cardíaca Os animais que apresentaram pressão diastólica final do ventrículo esquerdo (PDFVE) maior que 15,0 mmHg, aumento da razão peso ventricular direito/peso corporal (> 0,8 mg/g) e presença de congestão pulmonar foram considerados positivos para ICC. 12–14 Avaliação Hemodinâmica Após a sexta semana, os animais foram anestesiados com xilazina (12 mg/kg i.p.) e cetamina (90 mg/kg i.p.). Um cateter de polietileno (PE-50) foi colocado na artéria carótida direita. A pressão arterial foi registrada e o cateter foi posicionado no ventrículo esquerdo para realizar o registro da pressão ventricular. Os dados foram registrados por um transdutor de pressão (strain gauge, Narco Biosystem Miniature Pulse Transducer RP-155, Houston, Texas, EUA), acoplado a um amplificador de pressão. Os sinais analógicos de pressão foram digitalizados por um sistema de aquisição de dados (CODAS‑Data Acquisition System, Akron, Ohio, EUA) com uma taxa de amostragem de 2.000 Hz. Esses dados foram utilizados para determinar a pressão arterial diastólica (PAD), a pressão arterial sistólica (PAS), a pressão arterial média (PAM), a frequência cardíaca (FC), a pressão sistólica do ventrículo esquerdo (PSVE), a PDFVE e a dP/dt máxima positiva e negativa do ventrículo esquerdo (+ dP/dt max , -dP/dt max ), conforme descrito anteriormente. 15 Os animais que apresentaram PDFVE superior a 15 mmHg na avaliação hemodinâmica foram considerados com disfunção ventricular esquerda. 13 235