ABC | Volume 115, Nº1, Julho 2020

Artigo Original Silva-Bertani et al. Mecanismo da redução do colágeno I no coração obeso Arq Bras Cardiol. 2020; 115(1):61-70 Atividade da metaloproteinase-2 miocárdica A atividade daMMP-2miocárdica foi determinada conforme descrito por Tyagi et al. 26 Foram usadas seis amostras em cada grupo para garantir que todas as amostras fossem analisadas na mesma corrida de eletroforese para evitar variações entre géis. Resumidamente, os tecidos do ventrículo esquerdo foram homogeneizados em um tampão contendo: Tris 50 mM, pH 7,4, NaCl 0,2M, Triton-X 0,1% e CaCl 2 10 mM. O homogenato foi centrifugado a 4°C durante 20 minutos a 12.000 rpm. O sobrenadante foi coletado, e o conteúdo total de proteínas foi determinado pelo método de Bradford (Bradford 1976). As amostras foramdiluídas emum tampão de aplicação contendo: 0,5 M Tris, pH 6,8, 100% glicerol e 0.05% azul de bromofenol. As amostras foram carregadas em poços de SDS-poliacrilamida a 8% contendo gelatina a 1%. Foi realizada a eletroforese em um dispositivo Bio-Rad a 80 V durante duas horas. O gel foi removido e lavado duas vezes com Triton-X-100 a 2,5% e subsequentemente lavado com 50 mM de Tris, pH 8,4. O gel foi subsequentemente incubado a 37°C durante a noite em uma solução de ativação contendo 50 mM de Tris, pH 8,4, 5 mM de CaCl2 e ZnCl2. A coloração foi realizada durante 2 horas com azul de Coomassie a 0,5%, e a descoloração foi realizada com metanol a 30% e ácido acético a 10% até que bandas claras fossem observadas sobre um fundo escuro. Os géis foram fotografados, e a intensidade da ação gelatinolítica (bandas claras) foi analisada em UVP, UV e um analisador de imagem White Darkhon. Análise estatística Antes da análise estatística, todos os dados foram testados quanto à normalidade usando o teste Shapiro-Wilk. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos ao teste t de Student para amostras independentes. O teste de correlação de Pearson foi utilizado para avaliar a associação entre as variáveis colágeno I, MMP-2, TIMP e leptina. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando SigmaStat para Windows (Versão 3,5). O nível de significância considerado foi de 5 % ( α = 0,05). Resultados Características gerais dos animais As características gerais dos animais encontram-se na Tabela 1. O peso corporal final; os depósitos de gordura epididimal, retroperitoneal e visceral; a GC total; e o IA foram significativamente mais altos no grupo obeso do que no grupo controle. Durante o período experimental, os animais no grupo obeso consumiram menos comida e calorias do que os animais do grupo controle; no entanto, a eficiência alimentar foi maior nos animais obesos. Perfis metabólicos e endócrinos Os perfis metabólicos e endócrinos estão resumidos na Figura 1. A obesidade a longo prazo induzida por alto teor de gordura levou a alterações metabólicas e hormonais significativas. Houve um aumento significativo na AUC de glicose, bem como nos níveis de insulina e leptina no grupo obeso, em comparação com o controle. Os animais obesos apresentaram um aumento da AUC, insulina sérica e HOMA- IR. As medidas séricas de glicose, triacilglicerol, colesterol total, HDL e LDL foram semelhantes entre os grupos. Tabela 1 – Características gerais dos animais Variáveis Grupos Controle (n = 20) Obeso (n = 21) Valor de p PCI (g) 151 ± 11 151 ± 11 0,290 PCF (g) 480 ± 51 534 ± 58 0,009 Gordura epididimal (g) 9,3 ± 2,3 14,2 ± 3,4 < 0,001 Gordura epididimal/100g PCF 1,9 ± 0,5 2,7 ± 0,6 < 0,001 Gordura retroperitoneal (g) 10,5 ± 3,3 21,7 ± 5,9 < 0,001 Gordura retroperitoneal/100g PCF 2,2 ± 0,7 4,1 ± 1,1 < 0,001 Gordura visceral (g) 6,3 ± 1,4 11,2 ± 4,2 < 0,001 Gordura visceral/100g PCF 1,3 ± 0,3 2,1 ± 0,8 < 0,001 GC (g) 26,1 ± 6,2 47,2 ± 12,3 < 0,001 Índice de adiposidade 5,6 ± 0,9 8,8 ± 1,6 < 0,001 Consumo alimentar (g/dia) 22,8 ± 2,1 17,0 ± 2,3 < 0,001 Ingestão calórica (kcal) 67,4 ± 6,3 62,1 ± 8,2 0,03 Eficiência alimentar (%) 2,1 ± 0,2 2,7 ± 0,2 < 0,001 Valores são média ± desvio padrão. GC: gordura corporal; PCF: peso corporal final; PCI: peso corporal inicial. Teste t de Student. 64