ABC | Volume 114, Nº6, Junho 2020

Artigo Original Yurre et al. Avaliação dos efeitos cardíacos de WSMoL Arq Bras Cardiol. 2020; 114(6):1029-1037 Introdução Moringa oleifera Lamarck (Moringaceae) é uma árvore nativa da região sul do Himalaia, amplamente cultivada na Ásia e nos trópicos, principalmente devido ao seu uso para clarificação de água. Tem sido cultivada como um remédio tradicional, utilizada nas indústrias alimentar, cosmética e farmacêutica, 1,2 e também é usada para tratar várias doenças, como câncer e doenças crônicas e infecciosas. 3,4 Uma lectina solúvel em água isolada das sementes de M. oleifera (WSMoL) tem demonstrado atividade inseticida, 5-7 e estudos in vitro demonstraramsua atividade antibacteriana contra bactérias corrosivas e patogênicas. 8-10 A WSMoL demonstrou atividade anti-inflamatória in vitro em macrófagos murinos estimulados por lipopolissacarídeos, 11 e foi capaz de ativar linfócitos humanos a partir de culturas de células mononucleares do sangue periférico, mostrando um efeito imunomodulador. 12 Também tem sido comprovado queWSMoL é uma das proteínas coagulantes encontradas nas sementes de M. oleifera , 8,13 e é capaz de reduzir a turbidez e a ecotoxicidade de amostras de água coletadas de um riacho poluído. 14 Está bem demonstrado que muitos antibióticos e algumas classes de drogas anti-inflamatórias estão frequentemente associados a efeitos cardiotóxicos. 15,16 Entre os eventos adversos no sistema cardiovascular, estão a ocorrência de insuficiência cardíaca com disfunção ventricular sistólica, arritmias e isquemia miocárdica. 17 Classicamente, como uma consequência de cardiotoxicidade, podem ser observadas alterações no eletrocardiograma (ECG), tais como o prolongamento do intervalo QT, o qual tem sido observado em pacientes que usaram várias classes de drogas antimicrobianas, incluindo macrólidos e fluoroquinolonas. 18-20 Entre os macrólidos, a administração intravenosa de eritromicina apresenta o risco maior de aumento do intervalo QT, e arritmias fatais têm sido relatadas quando foi usada isoladamente ou em combinação com outras drogas que prolongam o intervalo QT. 16 Portanto, a proteção da função cardíaca atualmente está um desafio constante para a indústria farmacêutica, autoridades reguladoras e médicos que enfrentam reações clínicas adversas de vários agentes terapêuticos na prática clínica. WSMoL tem surgido como um potencial medicamento antibacteriano e como um agente imunomodulador. Algumas lectinas de plantas não são tóxicas para mamíferos, 21,22 enquanto outras têm sido relatadas como prejudiciais quando ingeridas ou administradas por outros meios, como injeção intraperitoneal. 23 Portanto, como um dos passos necessários para determinar a segurança de WSMoL, este estudo avaliou os possíveis efeitos cardiotóxicos desta proteína. Métodos Material das plantas e isolação da lectina Foram coletadas sementes de moringa oleifera em Recife (Pernambuco, Brasil) com a autorização (nº 38690) do Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio) e armazenadas a −20 ºC. Uma amostra do material coletado foi armazenada como um atestado de espécie (número 73345) no herbário Dárdano de Andrade Lima do Instituto Agronômico de Pernambuco. Foi registrado o acesso (A6CAB4C) no Sistema Nacional de Gestão do Patrimônio Genético e do Conhecimento Tradicional Associado (SisGen). A WSMoL foi isolada a partir do pó das sementes de acordo com o protocolo previamente descrito por Coelho et al., 5 Resumidamente, as proteínas foram extraídas em água destilada, e, após filtração e centrifugação, o extrato foi tratado com sulfato de amônio com saturação de 60% 24 durante 4 h a 28 °C. Após outra centrifugação, o precipitado foi ressuspenso em água e dialisado durante 8 h contra água destilada (4 h) e NaCl 0,15 M (4 h). A fração dialisada (100 mg de proteínas) foi carregada em uma coluna de quitina equilibrada comNaCl 0,15 M (taxa de fluxo de 20 mL/h), e o WSMoL foi eluído com 1,0 M de ácido acético. A lectina isolada foi dialisada contra água destilada com três trocas de líquido para eliminação do eluente. A atividade de ligação de carboidratos da lectina foi monitorada durante o processo de purificação pelo ensaio da atividade hemaglutinante, de acordo com o método descrito por Paiva e Coelho. 25 Animais Foram utilizados camundongos machos adultos C57BL/6 mantidos no Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho (IBCCF) da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ) sob condições controladas de temperatura constante (23 °C), com um ciclo claro/escuro de 12h/12h e acesso livre a comida e água. Todos os experimentos foram realizados de acordo com os Princípios Éticos de Pesquisa em Animais adotados pelo Colégio Brasileiro de Experimentação Animal, e os protocolos aplicados foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Animais da UFRJ, sob número de protocoloDFBCICB041. Os camundongos foram utilizados para experimentos durante 21 dias. Condições experimentais Os animais foram separados em dois grupos experimentais: CNTRL (grupo controle) e WSMoL (animais tratados com WSMoL). Vários estudos do nosso grupo têm extensivamente realizado experimentos comWSMoL utilizando concentrações entre 10 μg/ml e 0,2 mg/ml 5-12 com a finalidade de testar diversos efeitos biológicos de WSMoL. No presente estudo, para testar a cardiotoxicidade desta proteína purificada, foi utilizada uma concentração de WSMoL 10 vezes mais alta. Deste modo, os animais do grupo WSMoL foram tratados com a lectina (proteína purificada) por gavagem, com uma concentração 5mg/kg do peso corporal (equivalente a 2mg/ml) durante 21 dias. Os animais no grupo CNTRL foram tratados com água milli-Q por gavagem durante 21 dias. Hipertrofia cardíaca Com a finalidade de avaliar a existência de possível hipertrofia cardíaca, os corações dos camundongos foram pesados, e os dados foram normalizados, calculando as relações peso cardíaco/peso corporal (PC/PCorp) e peso cardíaco/comprimento tibial (PC/CT). 26,27 Após a pesagem, os animais foram sacrificados por meio de deslocamento cervical. Subsequentemente, os corações foram extraídos, lavados com solução salina tamponada com fosfato (PBS), secados para remover o excesso de líquido e pesados. O comprimento tibial foi medido com um paquímetro. 1030