ABC | Volume 113, Nº5, Novembro 2019

Artigo Original Vasconcelos et al. Efeitos antiarrítmicos do D-limoneno Arq Bras Cardiol. 2019; 113(5):925-932 Introdução Apesar das pesquisas extensas realizada sobre arritmias cardíacas nas últimas décadas, apenas um pequeno número de drogas antiarrítmicas surgiu para serem adicionadas ao atual arsenal terap utico para essa condição. Além disso, os antiarrítmicos “clássicos” apresentam sérias limitações de eficácia e segurança e apresentam vários efeitos colaterais. 1,2 Na busca de alternativas terap uticas para arritmias, estudos recentes examinaram compostos químicos de ocorr ncia natural, com o objetivo de avaliar seus efeitos nos parâmetros cardíacos. Por exemplo, estudos com os monoterpenos pulegona e geraniol mostraram um inotropismo negativo no miocárdio de mamíferos através do bloqueio das correntes de Ca 2+ e K + . 3-5 Mais recentemente, Vasconcelos et al., 6 verificaram que o citronelol e o nerol apresentam inotropismo negativo no átrio esquerdo de cobaias. O D-limoneno (DL) (Figura 1), é um monoterpeno alcoólico e o principal componente do óleo essencial extraído de espécies cítricas, como limão, lima e laranja. 7 Estudos anteriores demonstraram que o DL possui baixa toxicidade e apresenta propriedades antioxidantes, 8,9 vasodilatadoras, 10,11 e anti-hipertensivas. 12 O efeito do DL no coração ainda não foi elucidado e as investigações sobre seu mecanismo de ação podem fornecer novos insights sobre o DL e o sistema cardiovascular. Opresente estudo, portanto, objetivou avaliar o potencial efeito antiarrítmico do DL utilizando abordagens in vivo e ex vivo . Métodos Produtos químicos Os produtos químicos utilizados foram: d-limoneno (DL: pureza: 97%) e S-(−)-Bay K8644, ambos adquiridos de Sigma Aldrich (Chemical CO, EUA), e cetamina e xilazina (adquiridos de Sespo, São Paulo), Brasil). A solução estoque de DL foi preparada utilizando uma mistura de solução salina/ Cremophor ® (0,15% v/v); o S-(−)-Bay K8644 foi diluído em metanol e a solução de DL em água destilada. As soluções estoque foram preservadas a 0 °C e diluídas com água destilada, se necessário. Os veículos (metanol ou solução salina + Cremophor ® ) não demonstraram nenhum efeito nas preparações de controle. Animais Trinta e seis ratos sadios ( Rattus norvegicus ), pesando entre 250 e 350 g, foram obtidos de col nias do Departamento de Fisiologia da Universidade Federal de Sergipe, Brasil. Eles foram mantidos sob condições de temperatura padrão (22 ± 2 o C) em um ciclo claro/escuro de 12 horas (luzes acesas às 06h00) e foram alimentados com uma dieta padrão (Labina ® ) com água ad libitum . Em cada conjunto de experimentos, os ratos foram divididos em dois grupos: controle com 4 ou 6 animais e grupo tratado com DL, com 4 ou 6 animais. Todos os protocolos experimentais foram previamente aprovados pelo Comit de Ética e Cuidados Animais da Universidade Federal de Sergipe. Efeitos do DL nos parâmetros hemodinâmicos in vivo Osratosforamanestesiadoscomcetaminaexilazina(80mg/kg e 10 mg/kg; por via intraperitoneal, respectivamente) e cateteres de polietileno foram implantados na aorta abdominal e na veia cava inferior através da artéria e da veia femoral esquerda, respectivamente. Após a inserção e fixação por fios de algodão, os cateteres foram tunelizados subcutaneamente e exteriorizados através de uma incisão na região cervical posterior do animal. As incisões foram fechadas e foi permitido aos animais um período de recuperação pós-operatório de 24 horas. A pressão arterial média (PAM) e a frequ ncia cardíaca (FC) foram registradas por meio de um transdutor de pressão (Edwards LifeSciences, Irvine, CA, EUA) acoplado a um amplificador (FE221, Bridge Amp; ADInstruments, Bella Vista, NSW, Austrália). Após o período de recuperação pós-operatório, PAM e FC foram registrados antes (valores basais) e após a administração in bolus de DL (1, 5, 10, 20 e 40 mg/kg, i.v.) ou veículo para obter curvas dose-resposta. A curva do DL (n = 6) foi comparada com a curva do veículo (n = 6). Medidas eletrocardiográficas in vivo Os animais de ambos os grupos, controle (n = 4) e tratados com DL (n = 4), foram heparinizados (200 I.U, i.p.), anestesiados com uma injeção i.p. de cetamina (80 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg), e a veia cava foi canulada como descrito anteriormente. Os ratos foram mantidos em decúbito dorsal com respiração espontânea e veículo ou DL foi administrado (10 mg/kg). O volume injetado através da cânula foi o mesmo para todas as concentrações (200 µL). Para registrar o sinal eletrocardiográfico, os eletrodos foram colocados sob a pele na disposição do eletrodo DII. Os parâmetros eletrocardiográficos observados foram o intervalo PR, intervalo QT, duração do complexo QRS e FC. O intervalo QT foi corrigido pela fórmula de Bazett modificada para ratos. 13 Experimentos no coração isolado perfundido (técnica de Langendorff) Os animais, de ambos os grupos, controle (n = 4) e tratados com DL (n = 4), foram heparinizados (200 UI, i.p.) e após 15 min o coração foi retirado e montado em um sistema de perfusão aórtica do tipo Langendorff, em um fluxo constante (10 mL/min). 14 Os corações foram continuamente perfundidos com solução de Krebs-Henseleit (em mM: 120 NaCl, 5,4 KCl, 1,2 MgCl 2 , 1,25 CaCl 2 , 2 NaH 2 PO 4 , 27 NaHCO 3 , 11 glicose), previamente filtrados através de uma membrana de acetato de celulose (0,45 µm). O pH foi ajustado para 7,4 e oxigenado (95% O 2 + 5% CO 2 ) e mantido a 37 ± 0,1 o C (Haake F3, Berlim, Alemanha). Os sinais cardíacos do eletrocardiograma (ECG) foram capturados utilizando-se tr s eletrodos (Ag/AgCl/NaCl, 1 M) que foram colocados dentro da câmara próxima ao coração. Os sinais foram amplificados, digitalizados (PowerLab 4/35 ADInstruments, EUA) e armazenados em um computador. A pressão desenvolvida do ventricular esquerdo (PDVE, mmHg) e a FC (bpm) foram medidas utilizando-se um balão cheio 926