ABC | Volume 113, Nº1, Julho 2019

Artigo Original Wollmann et al Caracterização do pericárdio descelularizado Arq Bras Cardiol. 2019; 113(1):11-17 Figura 1 – Caracterização histológica do pericárdio humano fresco e pericárdio humano descelularizado. Coloração hematoxilina e eosina (H&E) e a coloração de DAPI não mostraram evidência de células nos cortes teciduais (D e E). H&E e RPM mostraram que a descelularização não afeta a estrutura dos feixes de colágeno); no entanto, houve uma redução no colágeno e aumento na espessura do tecido descelularizado em comparação ao tecido fresco (D e F) padrões, usado para cortar o pericárdio. Antes de cada teste, foram obtidos espessura, largura e comprimento inicial das amostras. A espessura e a largura são necessárias para cálculo da área transversal e consequentemente do estresse (equação 1). O comprimento inicial é necessário para cálculo da tensão e porcentagem de alongamento (equação 2). A espessura foi medida com um medidor próprio em três pontos do tecido. Aplicou-se uma pré-carga de 0,1 N e velocidade de 5mm/min. Equação 1. Cálculo do estresse σ = F/A onde: σ é o estresse, em Megapascal [MPa]; F é a força, em Newton [N] e A é a área transversal em milímetros quadrado (mm 2 ) Equação 2. Cálculo da porcentagem de alongamento %El = (ΔC/Ci) x 100 = ε x 100 onde: %El é a porcentagem de alongamento; ΔC é a variação do comprimento da amostra, em milímetros (mm); Ci é o comprimento inicial da amostra em mm, e ε é a tensão em mm/mm Análise estatística As variáveis contínuas com distribuição normal foram expressas em média ± desvio padrão (DP), e aquelas com distribuição não normal em mediana e intervalo interquartil SD. As variáveis categóricas foram expressas em frequências ou porcentagens. O teste t de Student e o teste de Mann-Whitney foram usado para variáveis contínuas de distribuição normal e não normal, respectivamente. Todos os testes foram bicaudais, e um valor de P ≤ 0,05 foi considerado significativo. A análise estatística foi realizada usando o SPSS 23.0. Resultados Características dos doadores A idade média dos doadores foi 39 ± 14 anos, variando entre 17 e 59 anos. A maioria n = 12 (86%) dos doadores se autodeclarou como brancos e um indivíduo como afrodescendente n = 1 (7%). A raça de um paciente (7%) não foi encontrada registrada. Avaliação microbiológica Solução de transporte foi positiva em cinco das 14 amostras. Foram identificadas as bactérias Corynebacterium spp . , Streptococcus salivarius , Staphylococcus aureus , Klebsiella oxytoca , Anaerococcus prevotii e Leuconostoc pseudomesenteroides . Os demais testes microbiológicos após descontaminação e descelularização foram negativos. Análise da integridade da MEC e remoção das células A coloração com H&E e DAPI mostraram redução dos núcleos visíveis presentes no tecido do pericárdio após a descelularização (Figura 1 A, B, D e E). Os principais componentes da MEC foram examinados com coloração RMP (colágeno: amarelo; elastina: preto; glicosaminoglicanos: azul). A estrutura das fibras extracelulares do pericárdio descelularizado reteve grupamentos de colágeno e elastina similares aos do pericárdio fresco. No entanto, o tecido descelularizado apresentava espessura aumentada em comparação ao tecido fresco (Figura 1 C e F). 14