ABC | Volume 111, Nº2, Agosto 2018

Artigo Original Zhong et al Pioglitazona e via de sinalização de VEGFR-2 Arq Bras Cardiol. 2018; 111(2):162-169 Figura 1 – O VEGFR-2 é o alvo potencial para a pioglitazona. (A) modelo de docagem (docking) molecular 3D da pioglitazona com VEGFR-2; estrutura verde: conformador da pioglitazona. (B) modelo de docking molecular 2D da pioglitazona com VEGFR-2. Ligações de hidrogênio entre a pioglitazona e o VEGFR-2 estão indicadas com linha verde. (C e D) Western Blot dos níveis de VEGFR-2 e fosfo-VEGFR-2 (Tyr1175) de cardiomiócitos de ratos neonatais sob estímulo hipertrófico, tratados com 0, 10, 20 (μM) de pioglitazona por 24 houras, e (C) intensidade das bandas normalizada para β-actina (n = 12 em cada grupo). Todos os dados são apresentados em média ± DP. Comparações com o grupo controle: *p < 0,01 com grupo pioglitazona 10 μM; # p < 0,01, calculado por one-way ANOVA e teste post hoc de Bonferroni para comparações pareadas. A B C D Pioglitazona Pioglitazona (µM) 0 10 20 pVEGFR2 (Tyr1175) VEGFR2 β-actin * *# Controle Pioglitazona 10 µM Pioglitazona 20 µM 1.5 1.0 0.5 0.0 pVEGFR2 (Tyr1175) normalizada levels A pioglitazona promoveu apoptose e inibiu a hipertrofia dos cardiomiócitos induzida pela Ang II Para validar os efeitos da pioglitazona, foram avaliadas a viabilidade do cardiomiócitos e da hipertrofia induzida pela Ang II. O corante cristal violeta, um teste rápido e versátil para se detectar a viabilidade celular sob diversas condições de estímulo, 19 foi usado para avaliar a viabilidade celular. A pioglitazona inibiu a viabilidade dos cardiomiócitos de modo dose dependente (Figuras 2A e 2B, p < 0,01), com concentrações efetivas variando de 0 a 20 μmoL/L. O inibidor seletivo para VEGFR-2 apatinib também inibiu a viabilidade dos cardiomiócitos - (Figuras 2A e 2B, p < 0,01). A taxa de apoptose dos cardiomiócitos foi determinada pela técnica de marcação com corante AV/PI. As taxas apoptóticas nos grupos pioglitazona 20 μM, pioglitazona 10 μM, e apatinib 2 μM foram significativas maiores que no grupo controle (Figuras 2C e 2D, p < 0,01). A incorporação de [3H]-leucina induzida por Ang II foi significativamente menor após o tratamento com pioglitazona ou com apatinib, indicando que ambos inibiram a hipertrofia de cardiomiócitos. A pioglitazona inibiu a hipertrofia e promoveu a apoptose de cardiomiócitos pela supressão da sinalização do VEGFR-2 Os mecanismos potenciais da inibição induzida da hipertrofia dos cardiomiócitos pela pioglitazona e a promoção de apoptose dessas células foram avaliados in vitro . Em comparação aos cardiomiócitos sob condições controle, a pioglitazona aumentou significativamente a expressão do Bax e fosfo-P53 e diminuiu a expressão do fosfo-VEGFR-2 em cardiomiócitos de ratos neonatos sob estímulo hipertrófico (Figuras 1C e 3). Para avaliar se o VEGFR-2 é alvo da pioglitazona, os efeitos da droga sobre a expressão de VEGFR-2 e sinalização intracelular regulada pelo VEGFR-2 foram determinados 165