ABC | Volume 110, Nº1, Janeiro 2018

Artigo Original Hu et al Modulação da melatonina no cálcio nos cardiomiócitos Arq Bras Cardiol. 2018; 110(1):44-51 Figura 1 – A melatonina promoveu a ativação de ERK1 em células H9C2 contra H/R. As células H9C2 foram incubadas em condições normais ou em condições de H/R simuladas, em condições de H/R simuladas mais pré-tratamento com melatonina ou em condições de H/R simuladas mais pré-tratamento com melatonina e PD98059 (inibidor de ERK1). Os níveis de expressão de ERK1 fosforilado (p-ERK1) foram avaliados por Western Blot (A) e foram quantitativamente analisados (B). Todos os valores são apresentados como média ± DP. n = 3. SS p < 0,01 vs. grupo H/R; # p < 0,05 vs. grupo H/R + Mel. (Controle: grupo controle; H/R: grupo H/R, H/R + mel: grupo H/R + melatonina; H/R + mel + PD: H/R + melatonina + grupo PD98059) A B Níveis de Expressão (Densidade relativa) Control H/R H/R+Mel H/R+Mel+PD Controle H/R H/R+Mel H/R+Mel+PD 2,0 1,5 1,0 0,5 0 SS # p-ERK1 t-ERK1 Figura 2 – A melatonina previne a apoptose das células H9C2 contra H/R via ERK1 in vitro. A apoptose foi avaliada por TUNEL de fluorescência. Imagens de coloração TUNEL representativas (A) e análise quantitativa em células H9C2 (B). bar = 50 μm. Todos os valores são apresentados como a média ± DP. n = 3. ** p <0,01 vs. grupo controle; Sp < 0,05 vs. grupo H/R; # p < 0,05 vs. grupo H/R + Mel. (Controle: grupo de controle; H/R: grupo H/R; H/R + mel: grupo H/R + melatonina; H/R + mel + PD: grupo H/R + melatonina + PD98059) 70 60 50 40 30 20 10 0 Células apoptóticas (%) Controle H/R H/R+Mel H/R+Mel+PD Controle H/R H/R+Mel H/R+Mel+PD A B TUNEL DAPI Merge ** S # A melatonina protege a organização de F-actina em células H9C2 contra H/R via ERK1 Investigamos a organização da F-actina em células H9C2 às 4h após a reoxigenação por coloração FITC de fluorescência de faloidina. Os cardiomiócitos de controle mostraram organização regular e bem definida da actina, enquanto os cardiomiócitos no grupo H/R apresentaram disposição de F-actina mais difusa e irregular. As diferenças podem ser visualizadas nos cardiomiócitos representativos. O pré‑tratamento da melatonina melhorou a organização da actina F em cardiomiócitos em comparação com o grupo H/R, mas o PD98059 danificou a associação de F-actina pela inibição do efeito da melatonina (Figura 3). A melatonina reduz a sobrecarga de Ca 2+ em cardiomiócitos contra H/R via ERK1 Às 4 horas após a reoxigenação, investigamos o efeito da melatonina sobre a sobrecarga de Ca 2+ induzida por H/R em cardiomiócitos usando o corante fluorescente dependente de cálcio Fura-2. Os resultados mostraram que a fluorescência foi mais forte no grupo H/R do que no grupo controle, enquanto a fluorescência diminuiu no grupo da melatonina em comparação com o grupo H/R, o que indicou que H/R causou um aumento acentuado da concentração de Ca 2+ citosólica e que o pré-tratamento de melatonina inibiu significativamente o aumento induzido por H/R da concentração de Ca 2+ citosólica que foi reduzida por PD98059 (Figura 4). 47